怎样检测狗狗有没有得狂犬病?
目前,我国用于狂犬病毒抗体检测的试剂主要有三种:酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金免疫层析试验和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) 实验。每种方法都有各自的优缺点及适用范围,在临床上应依据不同医院的具体条件选择适宜的狂犬病毒抗体检测方法。 ELISA 是世界卫生组织推荐的狂犬病毒抗体诊断方法之一,其基本原理是抗原与抗体能在固相载体表面特异性结合并形成抗原抗体复合物,洗脱除去未结合的抗体,再将具有高催化活性的酶连接于抗体的相应位点。当该酶与底物溶液接触时,被酶切变为有色产物,颜色的深浅与待测标本中抗体的含量呈正比 [3]。 其优点在于能同时检测到IgG 和 IgM 二种抗体;可大批量检测;可用于血清、血浆、血清学混悬液等标本的检测;敏感性较高[4]。而缺点在于操作复杂,对人员要求较高且易造成假阳性结果[5]。 有研究指出,采用ELISA法检测犬血清中的抗狂犬病IgM、IgG 抗体,两种抗体检测的符合率达96.8%[6]。可见ELISA 可作为临床上初步筛查的方法。但由于检测时间较长,不适于急诊病例的诊断。另外,有研究表明使用 ELISA 试剂盒无法区分犬体内的抗狂犬病毒抗体是既往感染形成的抗体还是新近产生的抗体 [7]。因此,单凭一次检测结果就作出临床判断是很牵强的,应该结合病史、临床症状及流行病学史等综合判断。
2014 年新版《狂犬病的诊断标准》已不推荐使用间接酶标法,但仍有不少医疗机构在使用这一方法来检测狂犬病毒的抗体。有研究显示,虽然直接 ELISA 的敏感性高于间接 ELISA, 但是它们的特异性和重复性差异不大 [8]。如果使用间接 ELISA 来检查是否有狂犬病毒感染,一般只推荐用阳性对照作为 “阴性质控”;由于没有阴性控制,不能计算出敏感性数据。因此,对于间接 ELISA 的结果,临床医生不应将其视为有意义的诊断指标。
随着科技的进步,新的检测手段不断地涌现出来,为临床诊断提供了更准确的方法。例如近几年出现的免疫印迹技术(Western blot, WB)。W ostenblat等人利用WB 试验检测了美国、英国等国犬体内狂犬病毒的抗体水平,认为WB 可取代传统的被动血凝抑制试验,并可准确地确认感染状态,而且这种快速可靠的试验还可用于早期诊断疑似犬是否感染狂犬病毒[9,10]。
还有研究者将免疫荧光试验应用到狂犬病毒抗体的检测中也取得了不错的效果[11,12]。这些方法的灵敏度和特异性都较高,可作为进一步确诊的手段。 但目前这些新技术在我国还比较缺乏,很多中小型动物诊所仍以传统实验为主,这势必会影响临床诊断结果的准确性,不利于疾病的早发现早治疗。所以推广普及先进的实验室检测技术很有必要。